Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者的发展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现肾脏自身免疫球蛋白到显现1型式癌症诊断腹泻的成果领军在青少年时期就有不错的所述，多个肾脏自身免疫球蛋白HIV的青少年中所有70%在小鼠切换后10年内患癌症，而随访15年的青少年这一%缩减到84%。相比之下，占诊断1型式癌症一半以上的型式1型式癌症的得病的系统还很难得到充分的研究。

愈发多的人开始常用分期的系统来定义1型式癌症的成果：性状在显现多种肾脏自身免疫球蛋白时离开第1收尾，显现高血压异常时离开第2收尾，显现腹泻时离开第3收尾。一些多发肾脏自身免疫球蛋白HIV的性状，在1期和2期，成果较较为慢，并发展为得病的1型式癌症。我们以前所述了一一组在首次检查到多种肾脏自身免疫球蛋白样本后至较少10年无癌症的却是较为慢成果者，这一组病变人数较少，但相似性非常清楚。随后，我们发现肾脏自身蛋白特异性CD8+T中所央线粒体自由基当在成果平稳的病变中所基本不存在，但在近期得病和肇因的癌症病变中所很难以检查到。这可能得出结论，与成果病变相比，这些病变自身致病当的可调增强。

后期研究得出结论，尽管可调性T中所央线粒体(Treg)数量正常，但癌症病变存在一些动态缺陷，其中所包括对IL-2的自由基当战斗能力增加。此外，癌症病变中所的畸变CD4+T中所央线粒体可能对可调更具抵抗性，乏善可陈为畸变T中所央线粒体的抑制作用向西移动，其本质诱发的Treg和粘液诱发的诱导Treg，以及蛋白经历的CD4+T中所央线粒体中所IL-2自由基当向西移动。本研究的借以是所述了CD4+可调性T中所央线粒体(Treg)在一小群却是平稳成果者中所的相似性，他们的半数为43岁(31-72岁)，随访短时间为18-32年。

方法：BOX研究是一项以人群的系统化的斜向研究，在21岁以下确诊的病变亲属中所检查1型式癌症的危险因素。我们以前所述了经常性平稳成果者的相似性，他们保证多重肾脏自身免疫球蛋白HIV大约10年，但很难显现癌症的诊断腹泻，较为慢性或非同步外阴自身免疫。随后，10名继续保证无癌症并想要提供大量肾脏样本的平稳成果者纳入T和B中所央线粒体动态比对。在在此以前的研究中所，8名较为慢成果者(SP一组)，中所位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此间的肾脏自身免疫球蛋白HIV。所有的参与者都处于1型式癌症成果的1期，尽管一些人随后失掉了肾脏自身免疫球蛋白对某些蛋白的HIV自由基当，然而，一名病变已经处于2期至较少6年，但很难显现诊断腹泻，一名病变被病症为癌症，该受试者72岁，在采集实验样本时，其HbA1c升温到53 mmol/mol(7%)，在数据比对中所对该诱导同步进行了单独检验。转化外周血单个核能中所央线粒体(PBMCs)，采用多参数流式中所央线粒体绝技和T中所央线粒体抑制作用试制检验诱导中所Treg的频领军、变异式和动态。常用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和复出)同步进行无监督聚类比对，检验Treg变异式。

结果：与健康诱导相比，来自较为慢成果体的无意识CD4+T中所央线粒体的监督聚类揭示，激来时的无意识CD4+ Treg频领军缩减，与持续性诱导的TNFR相关蛋白(GITR)阐释缩减有关。一名HbA1c升温的病变与成果平稳者和切换的比对一组相比，Treg谱有所不同。动态比对得出结论，与健康诱导相比，来自平稳成果体的Treg介导的CD4+畸变T中所央线粒体抑制作用明显损坏。乏善可陈为对畸变CD4+T中所央线粒体CD25和CD134阐释的抑制作用缩减。

所示1 有的系统的变异式比对揭示，CD4+Treg亚型式在较为慢成果缓冲区中所缩减。由FlowSOM填充的Treg楼内，挤满在来自所有诱导的来时CD4+CD45RA -中所央线粒体上。根据标上物阐释鉴定出10个元簇:无意识T中所央线粒体_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T中所央线粒体;HLA-DR + GITR +无意识T中所央线粒体;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)常用9个不同Treg标上填充的10个元簇的MST。每个数据流代表人一个坦克部队(100个坦克部队)，更大的元坦克部队(10个元坦克部队)在数据流一组周围打磨。每个数据流中所的饼所示透露单个标上的阐释层级。(b)每个元聚类的热所示，以揭示整体标上阐释。(c, d)为HD一组(c)和SP一组(d)填充所示，以及FlowSOM识别的每个元簇的表层。(e-l)相较为核能素为每个metacluster装曲中所央线所示(核能素> 0.05%)考虑到为HD和SP一组:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T中所央线粒体(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T中所央线粒体(l)。深蓝色圆圈代表人人口为120人SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon相加符号秩验。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 常用CITRUS的数据比对证实，Treg频领军的缩减是成果平稳的徽章。AO门控(a - f)和柑橘比对(g-k)较为SP参与者和切换的HD参与者在CD4+CD45RA−T中所央线粒体上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会群体的代表人性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR阐释同步进行转化，模拟器FlowSOM社会群体。(b) HD(黑点)和SP(黑斑)一组以及诱导SP 606(深蓝色)中所CD25+ cd127的频领军汇总所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控闭包的装曲中所央线所示;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3阐释强度着色，箭头突出的簇被识别为SP和HD缓冲区彼此间的不同。(j)装曲中所央线所示揭示了在SP(黑斑)和HD(灰点)一组中所，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的相较为核能素(%)。(k)直方所示揭示每个簇的变异式(粉红色)和Treg标上相较为阐释与着重阐释(蓝色);上列，寄存器Treg_3;示例一行，寄存器Treg_4。着重与所有其他簇中所标上的阐释有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon相加符号秩验

所示3 与健康献血者相比，成果平稳者无意识treg的GITR缩减。每个无意识CD4+T中所央线粒体元簇(无意识T中所央线粒体_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T中所央线粒体;HLA-DR + GITR +无意识T中所央线粒体;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检查每个阐释标上的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)缓冲区的阐释热所示(sp606不包括在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇中所所有HD(红色)、所有SP(蓝色)和SP 606(深蓝色)的FlowSOM GITR阐释联接，揭示直方所示(c)和汇总所示(d)。Wilcoxon相加符号秩和验，p< 0.07(深蓝色)所有诱导包括，p< 0.05(蓝色)诱导SP 606和切换的HD不包括在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR阐释，从AO门控，从所有HD(红色)、所有SP(蓝色)和SP 606(深蓝色)联接，揭示直方所示(e)和汇总所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon相加符号秩验

所示4 来自平稳成果的CD4+ treg中所央线粒体遏制畸变CD4+T中所央线粒体的战斗能力增加。SP一组用蓝色的中所央线和圆圈透露，HD一组用红色的中所央线和圆圈透露，深蓝色的中所央线/圆圈透露诱导sp606。常用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T中所央线粒体同步进行分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被标上为CFSE, Treg按观察的%校准。用抗CD3 /28微珠诱导中所央线粒体，培育出3几天后同步进行流式中所央线粒体绝技检查。(a-d)与CD4+反之亦然者相较为应当的treg培育出(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者培育出。(a,b,f) CFSE再生(a,e)和CFSE抑制作用倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用倍数。常用HIV比对(激来时的响应当中所央线粒体含treg)计算抑制作用倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

所示5 畸变CD4+T中所央线粒体对平稳成果的T中所央线粒体诱导的抑制作用更敏感。SP一组用蓝色的中所央线和圆圈透露，HD一组用红色的中所央线和圆圈透露，深蓝色的中所央线/圆圈透露诱导sp606。常用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T中所央线粒体同步进行分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel标上，treg按观察的%校准。用抗CD3 /28微珠诱导中所央线粒体，培育出3几天后同步进行流式中所央线粒体绝技(CD25反染)和中所央线粒体因子比对。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者共同培育出。(a,b) CFSE再生(a)和CFSE抑制作用%-(b)。(c,d) CD25抑制作用%-(c)和CD134抑制作用%-(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育出中所的阐释。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

推论：我们得出的推论是，来自平稳成果子的诱导无意识CD4+Treg在GITR阐释中所得到了拓展和充沛，阐释了再进一步研究Treg在1型式癌症后果性状中所的关联性的不足之处。

中文翻译应当是：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28