Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中的逐渐扩展

从第一次经常单单现家兔自身病原躯到经常单单现1型式乳癌药理学症状的成效率在幼儿时期就有很好的描述，多个家兔自身病原躯感染性的幼儿之；还有70%在血清转换后10年内患上乳癌，而随访15年的幼儿这一数量减少到84%。相较于之下，占药理学1型式乳癌一半以上的型式1型式乳癌的得病机制还没有获取充分的研究成果。

日益多的人开始采用分期系统来定义1型式乳癌的成效：有机躯在经常单单现多种家兔自身病原躯时转到第1阶段，经常单单现高血压精神状态时转到第2阶段，经常单单现症状时转到第3阶段。一些多发家兔自身病原躯感染性的有机躯，在1期和2期，成效较愈来愈慢，并发展为得病的1型式乳癌。我们之前描述了一两组在首次检测到多种家兔自身病原躯样本后仅仅10年无乳癌的想像中愈来愈慢成效者，这两组病患者人数少，但基本特征非常明确。随后，我们发现家兔自身肝细胞特异性CD8+T细胞膜反应会在成效减愈来愈慢的病患者之中基本不存在，但在近期得病和经常性存在的乳癌病患者之中很容易检测到。这可能表明，与成效病患者相较于，这些病患者血栓反应会的抑制进一步提高。

早期研究成果表明，尽管抑制性T细胞膜(Treg)数量正常，但乳癌病患者存在一些功能性缺陷，其之中包括对IL-2的反应会技能减少。此外，乳癌病患者之中的现象CD4+T细胞膜可能对抑制愈来愈具抵抗性，表现为现象T细胞膜的依赖性进一步提高，自然消除的Treg和躯外消除的抑止Treg，以及肝细胞个人经历的CD4+T细胞膜之中IL-2反应会进一步提高。本研究成果的目的是描述了CD4+抑制性T细胞膜(Treg)在领头想像中减愈来愈慢成效者之中的基本特征，他们的总人数为43岁(31-72岁)，随访小时为18-32年。

步骤：BOX研究成果是一项以人群为基础的纵向研究成果，在21岁以下确诊的病患者亲属之中检查1型式乳癌的危险因素。我们之前描述了经常性减愈来愈慢成效者的基本特征，他们保持稳定多重家兔自身病原躯感染性超过10年，但没有经常单单现乳癌的药理学症状，愈来愈慢性或非进行时性血栓。随后，10名继续保持稳定无乳癌并愿意提供大量血液样本的减愈来愈慢成效者纳入T和B细胞膜功能性数据分析。在目前的研究成果之中，8名愈来愈慢成效者(SP两组)，之中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的家兔自身病原躯感染性。所有的参与者都属于1型式乳癌成效的1期，尽管一些人随后夺去了家兔自身病原躯对某些肝细胞的水痘会，然而，一名病患者从未属于2期仅仅6年，但没有经常单单现药理学症状，一名病患者被病人为乳癌，该受试者72岁，在采集实验样本时，其HbA1c急剧下降到53 mmol/mol(7%)，在数据数据分析之中对该遗传物质进行时了单独评量。除去外周血单个核细胞膜(PBMCs)，采用多表达式流式细胞膜拳法和T细胞膜依赖性试验评量遗传物质之中Treg的kHz、表观式和功能性。采用FlowSOM和CITRUS(聚类认定、表征和重返)进行时无督导聚类数据分析，评量Treg表观式。

结果：与健康遗传物质相较于，来自愈来愈慢成效躯的潜意识CD4+T细胞膜的督导聚类显示，激活的潜意识CD4+ TregkHz减少，与糖皮质激素抑止的TNFR相关蛋白(GITR)理解减少有关。一名HbA1c急剧下降的病患者与成效减愈来愈慢者和匹配的印证两组相较于，Treg小曲相同。功能性于数，与健康遗传物质相较于，来自减愈来愈慢成效躯的Treg介导的CD4+现象T细胞膜依赖性明显受损。表现为对现象CD4+T细胞膜CD25和CD134理解的依赖性减少。

布1 深入的表观式数据分析显示，CD4+Treg亚型式在愈来愈慢成效缓冲区之中减少。由FlowSOM降解的Treg室，聚集在来自所有遗传物质的活CD4+CD45RA -细胞膜上。根据标有物理解认定单单10个元簇:潜意识T细胞膜_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;潜意识T cell_4;CD49b潜意识T细胞膜;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞膜;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)采用9个不同Treg标有降解的10个元簇的MST。每个节点代表一个空降兵(100个空降兵)，很大的元空降兵(10个元空降兵)在节点两组周围手工。每个节点之中的饼布对此单个标有的理解行政级别。(b)每个元聚类的热布，以显示整躯标有理解。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)降解布，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相较丰度为每个metacluster筒该线布(丰度> 0.05%)确定为HD和SP两组:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +潜意识T细胞膜(h)、潜意识T cell_1(i),潜意识T cell_2 (j),潜意识T cell_3 (k) n d CD49b潜意识T细胞膜(l)。橘色边框代表捐赠者SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检查。此键适用于布形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

布2 采用CITRUS的预报得单单论断，TregkHz的减少是成效减愈来愈慢的标志。分级暂时性(a - f)和柑橘数据分析(g-k)比较SP参与者和匹配的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞膜上的差异。(a)性状CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群躯的民族特色布。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR理解进行时除去，模拟器FlowSOM群躯。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)两组以及遗传物质SP 606(橘色)之中CD25+ cd127的kHz汇总布。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+暂时性子集的筒该线布;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3理解强度制做，箭头引人注目的簇被识别为SP和HD缓冲区之间的不同。(j)筒该线布显示了在SP(蓝点)和HD(灰点)两组之中，CITRUS潜意识Treg_3和Treg_4的相较丰度(数量)。(k)直方布显示每个簇的表观式(粉红色)和Treg标有相较理解与剧中理解(蓝色);上列，CPUTreg_3;下面一行，CPUTreg_4。剧中与所有其他簇之中标有的理解有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检查

布3 与健康献血者相较于，成效减愈来愈慢者潜意识treg的GITR减少。每个潜意识CD4+T细胞膜元簇(潜意识T细胞膜_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;CD49b +潜意识T细胞膜;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞膜;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个理解标有的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)缓冲区的理解热布(sp606不包括在内)。(c,d)潜意识Treg_4元簇之中所有HD(红色)、所有SP(蓝色)和SP 606(橘色)的FlowSOM GITR理解串联，显示直方布(c)和汇总布(d)。Wilcoxon配对符号秩和检查，p< 0.07(橘色)所有遗传物质包括，p< 0.05(蓝色)遗传物质SP 606和匹配的HD不包括在测试之中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之中GITR理解，从分级暂时性，从所有HD(红色)、所有SP(蓝色)和SP 606(橘色)串联，显示直方布(e)和汇总布(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检查

布4 来自减愈来愈慢成效的CD4+ treg细胞膜掌控现象CD4+T细胞膜的技能减少。SP两组用蓝色的该线和边框对此，HD两组用金色的该线和边框对此，橘色的该线/边框对此遗传物质sp606。采用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜进行时分选。CD4+CD25−(这样的话者)被标有为CFSE, Treg按观察的数量滴定。用抗CD3 /28微珠重置细胞膜，养成3天后进行时流式细胞膜拳法检测。(a-d)与CD4+这样的话者相较应的treg养成(自躯)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者养成。(a,b,f) CFSE增生(a,e)和CFSE依赖性百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性百分比。采用感染性印证(激活的响应细胞膜内含treg)计算依赖性百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

布5 现象CD4+T细胞膜对减愈来愈慢成效的T细胞膜重置的依赖性愈来愈敏感。SP两组用蓝色的该线和边框对此，HD两组用金色的该线和边框对此，橘色的该线/边框对此遗传物质sp606。采用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜进行时分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel标有，treg按观察的数量滴定。用抗CD3 /28微珠重置细胞膜，养成3天后进行时流式细胞膜拳法(CD25反染)和细胞膜因子数据分析。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者共同完成养成。(a,b) CFSE增生(a)和CFSE依赖性次之(b)。(c,d) CD25依赖性次之(c)和CD134依赖性次之(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共养成之中的理解。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论断：我们得单单的论断是，来自减愈来愈慢成效子的重置潜意识CD4+Treg在GITR理解之中获取了适配和丰富，强调了进一步研究成果Treg在1型式乳癌可能性有机躯之中的差异性的必要。

原意单单处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28